Testowanie PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy) jest podstawową technologią diagnostyki molekularnej. Standaryzacja procesów opakowania i testowania bezpośrednio wpływa na dokładność i biografię wyników. Ten artykuł zawiera profesjonalną perspektywę kluczowych punktów kontroli jakości w całym procesie testowania PCR.
Przykładowy odbiór i obróbka wstępna są pierwszymi krokami w tym procesie. Laboratoria muszą ściśle zweryfikować identyfikację próbek, warunki transportu i czas przechowywania, aby zapewnić integralność próbki. Po otrzymaniu próbki muszą być ponumerowane i zarejestrowane w gabinecie biosa i podlegać procedur przetwarzania pre -, takie jak lizowanie i ekstrakcja kwasu nukleinowego na podstawie rodzaju testu. Podczas tego etapu wymagany jest system weryfikacji osoby dwa-, aby zapobiec zanieczyszczeniu krzyżowym -.
Przygotowanie systemu reakcji PCR należy wykonać w czystej ławce. Operatorzy muszą nosić urządzenia ochronne poziomu 3 i użyć Nuclease - bezpłatne materiały eksploatacyjne. Przygotowanie odczynników przylega do zasady „jednokierunkowego przepływu pracy”, przechodząc z obszaru przygotowania odczynnika do obszaru przetwarzania próbki, a następnie do obszaru wzmocnienia. Kontrole negatywne, kontrole pozytywne i kontrole wewnętrzne muszą być uwzględnione w każdej partii reakcji w celu monitorowania ważności eksperymentalnej.
Podczas fazy wzmocnienia i testowania instrument PCR musi być przedstrowany przed - parametry cyklu temperatury. Procedura reakcji zwykle obejmuje trzy etapy: denaturacja (94 - 95 stopnia), wyżarzanie (50-65 stopni) i rozszerzenie (72 stopnie). Liczba cykli jest dostosowywana na podstawie celu wykrywania. PCR fluorescencji w czasie rzeczywistym wymaga również monitorowania progu sygnału fluorescencyjnego określonych kanałów.
Analiza wyników i raportowanie muszą być wykonywane przez wykwalifikowanych techników. Surowe dane muszą zostać sprawdzone przez co najmniej dwóch specjalistów, aby potwierdzić morfologię krzywej wzmocnienia, wiarygodność wartości CT i zgodność materiałów kontroli jakości ze standardami. Raport końcowy powinien zawierać informacje na temat metodologii testowej, podstawy interpretacji wyników oraz stwierdzenie ograniczeń testowych.
Cały proces ściśle przestrzega ISO 15189 i odpowiednich specyfikacji CDC. Wdrażany jest potrójny system gwarancji monitorowania środowiska, konserwacji sprzętu i szkolenia personelu, aby zapewnić niezawodność i identyfikowalność testów PCR.